官方微信
官方QQ
【摘要】目的探讨肿痛熏洗液对大鼠肛门直肠溃疡相关炎性因子调控作用。方法将42只清洁级雄性SD大鼠随机分为A组（肿痛熏洗液+马应龙痔疮膏组）、B组（肿痛熏洗液组）、C组（马应龙痔疮膏组）、D组（生理盐水组）、E组（造模不用药组）、F组（空白对照组），建立肛门直肠溃疡模型成功后，按分组每日肛门熏洗及上药，3d后采血待行血清IL-6、COX-2、TNF-α水平检测。结果A、B、C、D、E组血清IL-6、COX-2、TNF-α水平均高于F组（P<0.05），A、B、C组均可下调血清IL-6、COX-2、TNF-α水平，但A组最显著。结论肿痛熏洗液及马应龙痔疮膏治疗作用可能与下调血清IL-6、COX-2、TNF-α水平减轻局部炎性反应有关，二者联用效果最佳。
【关键词】肿痛熏洗液；马应龙痔疮膏；炎性因子；期刊发表
由NF-κB信号通路及其介导的相关炎性因子参与全身多器官组织的炎性反应[1-4]。大多数急性肛肠疾病及肛肠疾病术后，非特异性炎性反应是诱发局部肿痛症状的原因之一，目前临床上针对这一问题的解决办法较为有限，且多数西医干预措施存在不良反应多、价格高昂等弊端，因此开发有效地中医药治疗方案是很有必要的。在前期临床观察中，我们发现肿痛熏洗液可明显减轻肛门疾病术后肛门坠胀及疼痛不适[5]，且在动物实验中初步论证其镇痛机制为上调IL-10，降低PGE及NO水平[6]。
【关键词】肿痛熏洗液；马应龙痔疮膏；炎性因子；期刊发表
由NF-κB信号通路及其介导的相关炎性因子参与全身多器官组织的炎性反应[1-4]。大多数急性肛肠疾病及肛肠疾病术后，非特异性炎性反应是诱发局部肿痛症状的原因之一，目前临床上针对这一问题的解决办法较为有限，且多数西医干预措施存在不良反应多、价格高昂等弊端，因此开发有效地中医药治疗方案是很有必要的。在前期临床观察中，我们发现肿痛熏洗液可明显减轻肛门疾病术后肛门坠胀及疼痛不适[5]，且在动物实验中初步论证其镇痛机制为上调IL-10，降低PGE及NO水平[6]。
本研究通过建立肛门直肠溃疡模型替代肛肠疾病术后状态，探讨通过肿痛熏洗液及马应龙麝香痔疮膏对NF-κB信号通路介导的相关炎性因子血清水平影响，以进一步证实其作用机制。
1 、材料与方法
1.1 动物
清洁级健康雄性SD大鼠42只，体质量180~220g，饲养于西南医科大学实验动物中心[自然光照明、湿度（60±10）%、温度（20±2）℃]，自有摄食饮水，适应性喂养1周进行实验。
1.2 实验器材
清洁级健康雄性SD大鼠42只，体质量180~220g，饲养于西南医科大学实验动物中心[自然光照明、湿度（60±10）%、温度（20±2）℃]，自有摄食饮水，适应性喂养1周进行实验。
1.2 实验器材
手术刀、电子天平、数显式电热恒温水浴锅（常州诺基仪器有限公司）、离心机（上海艾研生物科技有限公司）、EP管、酶标仪（美国Bio-Rad公司）、37℃恒温箱、移液枪及枪头。
1.3 实验药品及试剂
肿痛熏洗液（由西南医科大学附属中医医院制剂室提供）、马应龙麝香痔疮膏（马应龙药业集团股份有限公司国药准字Z42021920）、0.9%氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司）、水合氯醛（天津市大茂化学试剂厂）、冰乙酸（实验室代购）、大鼠（Rat）白细胞介素6（IL-6）、环氧合酶2（COX-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒（以上试剂盒均购于上海桥杜生物技术有限公司）。
1.3 实验药品及试剂
肿痛熏洗液（由西南医科大学附属中医医院制剂室提供）、马应龙麝香痔疮膏（马应龙药业集团股份有限公司国药准字Z42021920）、0.9%氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司）、水合氯醛（天津市大茂化学试剂厂）、冰乙酸（实验室代购）、大鼠（Rat）白细胞介素6（IL-6）、环氧合酶2（COX-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒（以上试剂盒均购于上海桥杜生物技术有限公司）。
1.4 实验方法
1.4.1 麻醉
将水合氯醛与0.9%氯化钠注射液稀释成10%水合氯醛溶液，根据大鼠体质量按250mg/kg计算所需药量，将总药量1/3行腹腔注射后1min观察大鼠麻醉情况，若大鼠无意识则不再追加，若大鼠仍可活动则继续按总量1/3追加，最大剂量为所计算总量。
1.4.2 造模
麻醉显效后，用手术剪刀在齿线后正中线附近做一长约2cm、宽约1cm梭形切口，上达末断直肠，下至肛门皮肤，充分止血后用棉签蘸取冰醋酸涂抹于伤口，以红肿超过溃疡面>10mm，伴有大量炎性渗出，溃疡面>200mm2为造模成功标志。
1.4.3 给药
A、B组予肿痛熏洗液25mL/kg在恒温水浴过内熏洗20min[温度为（37.0±1.0）℃]，每天2次；D组同法与25mL/kg生理盐水熏洗；A、C组用0.18g/kg马应龙麝香痔疮膏涂抹于溃疡面。以上各组按上述方法连续用药3d。
将水合氯醛与0.9%氯化钠注射液稀释成10%水合氯醛溶液，根据大鼠体质量按250mg/kg计算所需药量，将总药量1/3行腹腔注射后1min观察大鼠麻醉情况，若大鼠无意识则不再追加，若大鼠仍可活动则继续按总量1/3追加，最大剂量为所计算总量。
1.4.2 造模
麻醉显效后，用手术剪刀在齿线后正中线附近做一长约2cm、宽约1cm梭形切口，上达末断直肠，下至肛门皮肤，充分止血后用棉签蘸取冰醋酸涂抹于伤口，以红肿超过溃疡面>10mm，伴有大量炎性渗出，溃疡面>200mm2为造模成功标志。
1.4.3 给药
A、B组予肿痛熏洗液25mL/kg在恒温水浴过内熏洗20min[温度为（37.0±1.0）℃]，每天2次；D组同法与25mL/kg生理盐水熏洗；A、C组用0.18g/kg马应龙麝香痔疮膏涂抹于溃疡面。以上各组按上述方法连续用药3d。
1.4.4 标本采集
心脏采血2~3 mL置于EP管中，4 ℃冰箱过夜，3000 r/min高速离心机离心10 min，移液枪移取上清液待行ELISA检测。
心脏采血2~3 mL置于EP管中，4 ℃冰箱过夜，3000 r/min高速离心机离心10 min，移液枪移取上清液待行ELISA检测。
1.4.5 指标检测
按试剂盒说明书行IL-6、COX-2、TNF-α水平检测，在450nm波长处测定各孔的OD值。绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
1.5 统计学处理
采用SPSS21.0软件行统计学分析。计量资料用（-x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 、结 果
A、B、C、D、E组血清IL-6、COX-2、TNF-α水平均高于F组（P<0.05），A、B、C组均可下调血清IL-6、COX-2、TNF-α水平，但A组最显著。见表1。
表1 各组大鼠IL-6、COX-2、TNF-α水平比较（xˉ±s ）
3 、讨 论
多项研究表明，通过抑制NF-κB信号通路活性可降低其下游炎性因子TNF-α等的表达从而减轻如乙酸所致的炎性反应[9-10]。手术创伤导致肛门良性疾病术后局部肿痛多为非特异性炎症，与NF-κB信号通路及其下游致炎因子关系密切，因而抑制NF-κB信号通路活化、降低血清IL-6、COX-2、TNF-α等的释放是解决这一问题的办法之一。
肿痛熏洗液为我院李五生教授多年运用于临床的经验方，全方以黄连解毒汤组成药物（黄连、黄柏、黄芩、栀子）为君药，以白头翁、紫花地丁、败酱草为臣药，加强君药之清热解毒的功效，以苦参、白芷、秦皮为臣药，以生大黄、当归为佐助药，以肉桂为反佐药，以木香为使。诸药合用，共凑清热燥湿，泻火解毒，活血化瘀，消肿止痛的作用[6]。本研究表明，肿痛熏洗液可降低肛门直肠溃疡模型大鼠血清IL-6、COX-2、TNF-α含量，肿痛熏洗液联合马应龙麝香痔疮膏最为显著，这可能是其减轻肛门疾病术后肿痛的原因之一，为该药广泛运用于临床提供了理论基础。
参考文献
[1] 蒋红,樊慧婷,罗园园,等.硫酸锌对大鼠压力性溃疡TNF-α、NF-κBp65表达的影响[J].中国老年学杂志,2019,39(23):5779-5782.
[2] 周岐鸣,张一凡,郑培永,等.清肠栓脐贴调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠溃疡性结肠炎[J].上海中医药大学学报,2019,33(3):68-74.
按试剂盒说明书行IL-6、COX-2、TNF-α水平检测，在450nm波长处测定各孔的OD值。绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
1.5 统计学处理
采用SPSS21.0软件行统计学分析。计量资料用（-x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 、结 果
A、B、C、D、E组血清IL-6、COX-2、TNF-α水平均高于F组（P<0.05），A、B、C组均可下调血清IL-6、COX-2、TNF-α水平，但A组最显著。见表1。
表1 各组大鼠IL-6、COX-2、TNF-α水平比较（xˉ±s ）
3 、讨 论
多项研究表明，通过抑制NF-κB信号通路活性可降低其下游炎性因子TNF-α等的表达从而减轻如乙酸所致的炎性反应[9-10]。手术创伤导致肛门良性疾病术后局部肿痛多为非特异性炎症，与NF-κB信号通路及其下游致炎因子关系密切，因而抑制NF-κB信号通路活化、降低血清IL-6、COX-2、TNF-α等的释放是解决这一问题的办法之一。
肿痛熏洗液为我院李五生教授多年运用于临床的经验方，全方以黄连解毒汤组成药物（黄连、黄柏、黄芩、栀子）为君药，以白头翁、紫花地丁、败酱草为臣药，加强君药之清热解毒的功效，以苦参、白芷、秦皮为臣药，以生大黄、当归为佐助药，以肉桂为反佐药，以木香为使。诸药合用，共凑清热燥湿，泻火解毒，活血化瘀，消肿止痛的作用[6]。本研究表明，肿痛熏洗液可降低肛门直肠溃疡模型大鼠血清IL-6、COX-2、TNF-α含量，肿痛熏洗液联合马应龙麝香痔疮膏最为显著，这可能是其减轻肛门疾病术后肿痛的原因之一，为该药广泛运用于临床提供了理论基础。
参考文献
[1] 蒋红,樊慧婷,罗园园,等.硫酸锌对大鼠压力性溃疡TNF-α、NF-κBp65表达的影响[J].中国老年学杂志,2019,39(23):5779-5782.
[2] 周岐鸣,张一凡,郑培永,等.清肠栓脐贴调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠溃疡性结肠炎[J].上海中医药大学学报,2019,33(3):68-74.
[3] Kang HH,Kim IK,Lee HI,et al.Chronic intermittent hypoxia induces liver fibrosis in mice with diet-induced obesity viaTLR4/MyD88/MAPK/NF-kB signaling pathways[J].Biochem Biophys Res Commun,2017,490(2):349-355.
[4] Savran M,Aslankoc R,Ozmen O,et al.Agomelatine could prevent brain and cerebellum injury against LPS-induced neuroinflammation in rats[J].Cytokine,2020,127(1):55.
[5] 李时超.肿痛熏洗液治疗RPH联合外痔切除术后肛门疼痛及坠胀的临床研究[D].泸州:西南医科大学,2017.
[6] 冯予希,李五生,蒋青峰,等.肿痛熏洗液对肛肠手术后疼痛模型大鼠血清一氧化氮、前列腺素E2及白细胞介素-10水平的影响[J].广西医学,2019,41(3):344-346.
[7] 王小青,高杨,马帅,等.肾蕨对乙酸致小鼠肛门溃疡的作用及NF-κB,TNF-α,IL-1β和COX-2表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2018,24(8):122-127.
[8] 苗明三,张梦飞,田硕.中药痔疮动物模型制备规范(草案)起草说明[J].中药药理与临床,2017,33(5):212-215.
[9] Rashidian A,Rashki A,Abdollahi A,et al.Dapsone reduced aceticacid-induced inflammatory response in rat colon tissue through inhibition of NF-kB signaling pathway[J].ImmunopharmacolImmunotoxicol,2019,41(6):607-613.
[10] Chamanara M,Abdollahi A,Rezayat SM,et al.Thymol reduces acetic acid-induced inflammatory response through inhibition of NF-kB signaling pathway in rat colon tissue[J].Inflammopharmacology,2019,27(6):1275-1283.
相关热词搜索：
